Bakterien – Aufarbeitung und Bewertung (CASO-Agar)

Das Material wird mit dem 100-fachen ihres Gewichts mit einer 0,9 % NaCl/0,01 % TWEEN 80-Lösung versetzt und 30 min mit einem Rundschüttler (500 U/min) in einem geeigneten Gefäß geschüttelt.
Jeweils 100 µl der erhaltenen Suspension wird auf CASO-Agar für die Bebrütung bei 37°C +/-2°C ausgespatelt.
Die Bebrütung erfolg bei 37°C bis zu vier Tagen. Nach Bebrütung erfolgt eine Gramfärbung, um eine Trennung der Bakterien in grampositiv und gramnegativ zu unterscheiden. Die Gramfärbung erfolgt nach der Fixierung auf einen Objektträger mit Gentianaviolett, Beizung mit Lugolscher Lösung, Differenzierung mit 96%igem Ethanol und Gegenfärbung mit Carbol Fuchsin. Mikroskopie bei 1000facher Vergrößerung, um anhand der Morphologie die einzelnen Bakterien differenzieren zu können. Grampositive Bakterien werden in Staphilokokken und Streptokokken, gramnegative werden in Pseudomonaden, Enterobakteriaceae und Nasserien unterschieden. Weitere Differenzierung durch Überimpfung auf Selektivnährmedien ist dann möglich.

Bakterien – Aufarbeitung und Bewertung (Selektivmedium für Salmonellen)

Das Material wird mit dem 100-fachen seines Gewichtes mit einer 0,9 % NaCl/0,01 % TWEEN 80-Lösung versetzt und 30 min. mit einem Rundschüttler (500 U/min) in einem geeigneten Gefäß geschüttelt.
Jeweils 100 µl der erhaltenen Suspension wird auf zwei OSCM 2-Agar  für die Bebrütung bei 37°C +2°C ausgespatelt. Die Bebrütung erfolg bei 37°C bis zu zwei Ta-gen. Mikroskopie bei 1000facher Vergrößerung, um anhand der Morphologie (Bestimmung der Geißeln) die einzelnen Bakterien differenzieren zu können. Bei einem Wachstum von Salmomella wird ein weiteres Nährmedium RAMBACH-Agar nach gleichen Vorgaben zur Bebrütung bei 37°C bis zu zwei Tagen zur Bestätigung präpariert.

Bakterien – Aufarbeitung und Bewertung (Selektivmedium für Legionellen)

Das Material wird mit dem 100-fachen seines Gewichtes mit einer 0,9 % NaCl/0,01 % TWEEN 80-Lösung versetzt und 30 min. mit einem Rundschüttler (500 U/min) in einem geeigneten Gefäß geschüttelt. Danach werden jeweils 10 ml vorbehandelt:

1. Hitzevorbehandlung: 10 ml Suspension werden in einem Wasserbad bei 50°C für 30 min. erhitzt.

2. Säurevorbehandlung: 10 ml Suspension werden bei 2500 U/min für 20 min. zentri-fugiert. Der Überstand wird bis auf 1 ml dekandiert. Danach werden 9 ml HO-KO-Puffer* hinzugefügt, vorsichtig geschüttelt und 5 min stehengelassen.

*HO-KO-Puffer = 3,9 ml einer 0,2 M (a) HCl (b)
25 ml einer 0,2 M KCl (c)
pH-Wert auf 2,2 einstellen durch Zusatz von 1 M KOH (d)

(a) Molare Masse, (b) Salzsäure, (c) Kaliumchlorid, (d) Kaliumhydroxid

Jeweils 0,1 ml der erhaltenen Suspension wird auf drei GVPC-Agar (Fa. OXOID) für die die Bebrütung bei 37°C +/- 2°C ausgespatel; 1. Medium mit der hitzevorbehandelten Suspension, 2. Medium mit der säurevorbehandelten Suspension und 3. Medium mit der nichtvorbehandelten Suspension. Mikroskopie bei 1000facher Vergrößerung.